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离心机分离实例一

2009-05-18 [788]

    猪肾中微粒体膜组分粗品的分离

      仪器与试剂

      1.超速离心机(冷冻离心机)和转头

      2.匀浆缓冲液。50m mol/L Hepes/NaOH (pH7.4),0.33mol/L蔗糖。

       3.重悬缓冲液。10m mol/L Hepes/NaOH (pH7.4)。

      方法

       1.使用韦林搅拌器(要求4℃预冷)在10倍体积(1L)的匀浆缓冲液(要求4℃预冷),中破碎100g猪肾皮质。

        2.将匀浆物在离心机中于8000×g离心15min;

         3.小心地转移出上清液,并将其在26000×g离心2min;

          4.用重悬缓冲液(要求4℃预冷)重悬离心得到的微体沉淀至蛋白质终浓度约为10mg/ml。这样得到的微粒体沉淀重悬物就是膜结合蛋白质的来源

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